生物实验报告

时间：2025-09-06 09:41:16 实验报告我要投稿

[推荐]生物实验报告

　　在不断进步的时代，需要使用报告的情况越来越多，报告中涉及到专业性术语要解释清楚。你知道怎样写报告才能写的好吗？下面是小编帮大家整理的生物实验报告，欢迎阅读与收藏。

[推荐]生物实验报告

生物实验报告1

　　医学生物化学是一门为医学院各专业开设的主干课程，是联系基础医学与临床医学的重要学科，在医学教学中具有重要作用。医学生物化学实验是一门可以自成体系，有其丰富的理论、技术内容的课程，在医学生物化学教学中占有突出的地位，它不仅可以以生动形象的实验现象帮助学生加深掌握医学生物化学的理论知识，更重要的是让学生掌握实验中的各种技术的基本原理，掌握常规实验仪器的主要性能与操作方法，培养学生在实验过程中发现问题、思考问题、分析问题和解决问题的能力。

　　一、传统的医学生物化学实验教学的弊端

　　我们以前进行的生物化学实验，其实验内容和考核方法都有弊端。

　　1.实验内容弊端。我们以前给学生开设的实验基本上都是验证性实验，一般是理论课讲述了相关知识，接着安排这个知识点的实验课。例如，理论课讲述了蛋白质的理化性质，这次实验课的内容就为“蛋白质的沉淀凝固”。课本上的理论都是前人的实验结果，对于这样的实验学生认为缺乏挑战性，实验操作中也不主动思考。医学生物化学实验课程的验证性实验太多，不能很好地发挥学生的主观能动性，也不利于学生思维能力和创造能力的培养。

　　2.考核方法的弊端。我们以前的医学生物化学实验考核成绩主要是学生的实验报告，忽略了学生在写实验报告的过程中存在抄袭现象。有的学生实验操作能力很差，抄袭别人的实验报告也可得高分。这种考核标准导致学生不重视实验过程，只注重实验报告的书写，不利于培养学生的动手能力，不利于培养学生分析问题和解决问题的能力。

　　二、生物化学实验教学改革

　　1.构建新的实验教学内容。对实验项目进行改革。我们以前医学生物化学实验内容：生物化学实验的基本知识与基本技能、蛋白质的沉淀和凝固、双缩脲法测定蛋白质的含量、还原糖含量的测定、氨基酸纸层析、尿淀粉酶活性的测定、血清尿素氮含量的测定、血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳、DNA的提取与鉴定、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用等。改革后的实验内为：蛋白质含量的'测定（考马斯亮蓝法）、氨基酸纸层析、酶促反应动力学实验、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用、葡萄糖含量的测定（葡萄糖氧化酶法）、血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳、组织DNA的提取与鉴定、碱性磷酸酶提取与鉴定等。经过对实验项目的改革，去掉部分淘汰实验和部分验证性实验，增加了分子生物学实验比例，增加了综合设计性实验项目。

　　综合设计性实验，就是在实践教学中，教师提出实验的总体要求，让学生自己设计实验。学生先进行分组，实验小组的各成员经过查阅文献资料、设计实验所用试剂仪器、设计实验步骤、进行预实验、制作幻灯片、小组课堂汇报这样的程序完成整个综合设计性实验。实验成功了，学生会有极大的成就感；如果有些实验不成功，带教老师进行引导，分析失败原因，再重复实验。这样，每位学生在整个实验中一直处于主体地位，避免了个别学生不动手操作、抄袭实验报告等不良行为，从而达到培养学生的创新意识，以及学生的动手、动脑能力的目的。

　　2.自编生化实验指导教材。我们以前所使用的实验教材有的内容目前已淘汰，有的内容不适合医学生，因此，我们参考了周爱儒主编的《生物化学》，药立波主编的《医学分子生物学》，赵亚华主编的《生物化学与分子生物学实验技术教程》，刘吉民主编的《医学生物化学与分子生物学实验教程》等，结合我校的实际情况，编写了《医学生物化学实验技术》实验讲义。对医学生物化学实验的基本实验内容进行精心的取舍，保留经典的实验内容如葡萄糖含量的测定、氨基酸纸层析、血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳等外，增加了综合设计性实验如组织DNA的提取与鉴定、碱性磷酸酶的提取与鉴定实验等的比例。这样一方面学生可以掌握生物化学实验的分光技术、层析技术、电泳技术等基本实验技术，另一方面通过综合设计性实验培养学生的创新能力，提高学生的综合素质。

　　3.让学生自己准备实验。传统的生物化学实验教学注重知识传递和操作能力的培养。上实验时，老师先讲实验原理、操作步骤、可能出现的结果，准备好试剂，调试好实验仪器，学生按部就班地操作即可，完全剥夺了学生的思维空间。让学生自己准备实验，学生可以全身心地投入到整个实验的各个准备阶段，例如试剂的配制、试剂的分装、仪器的调试等，在准备的过程中会出现各种问题，学生们在老师的指导下就要去分析为什么会出现这些问题，如何去解决这些问题。学生自己准备实验可以使学生获得从书本上学不到的知识和能力，从实验中得到更多的收获。

　　4.先做后讲。我们以前的实验大多为验证性实验，一般是老师讲完后学生再做，有时为了得到明确的实验结果教师参与过多，学生对实验印象不深。为此，我们决定采用先做后讲的归纳式教学方法，这种方法更适用于综合设计性实验，让学生一边做实验，一边观察讨论，整个实验做完后，让学生总结规律，老师只做归纳性、提高式讲解。这样的教学方法可以引导学生感知知识的发生过程，体验获得真知的喜悦。

　　5.应用多媒体技术丰富实验课教学。医学生物化学这门课的知识很抽象，教师讲课难度较大。多媒体技术通过文字、图像、动画和声音等传递信息。应用多媒体技术进行医学生物化学的教学，可以生动、形象地传递较多的知识，还可以帮助师生共同突破教学中的重点和难点，极大地提高教学质量。我们以前上实验课时都采用黑板板书，操作也只做一些简单的示范。由于班级人数较多，有一些学生看不到操作示范。现在我们把多媒体技术也运用在医学生物化学实验课堂上，教师把实验原理、实验试剂、实验仪器、操作步骤等做成幻灯片，比板书看起来更清晰，把实验操作也录成视频，做实验前先看一段实验操作步骤的录像，然后再操作，避免了学生看不到操作示范，这样可提高学生实验动手能力。

　　6.开放实验室。为了提高学生的实验操作能力，我们决定进行实验室开放，便于学生进行综合设计性实验的预实验及学生参与教师科研的实验。

　　（1）带教老师给学生讲解一些常用实验仪器的使用方法及注意事项，例如：电子天平、台式低速离心机、超低温离心机、恒温培养箱、水浴箱、电泳仪、烤箱、手提式不锈钢消毒器、分光光度计、PCR仪等。由实验技术人员管理、维护实验室及其仪器。

　　（2）实验室开放时间：周一到周五从18∶00～22∶00，周六、周日全天开放。带教老师和实验技术人员轮流值班，随时解决学生实验过程中的问题。

生物实验报告2

　　年级班实验人：组次：试验时间：

　　一、探究目的

　　1、通过探究帮助学生理解桦尺蠖体色变化的整个过程。

　　2、理解保护色对生物生存的意义。

　　二、探究步骤

　　1、发现并提出问题：______________________________________。

　　2、作出假设：___________________________________________________ 。

　　3、制定计划：

　　4、实施计划：认真记录和分析探究的`过程和结果和。

　　5、得出结论：_________________________________________________________ 。

　　6、表达交流。

　　三、讨论

　　1、第一代和第二代之间有什么变化？

　　2、第一代和第五代之间又有什么变化？

　　3、你能推测保护色的形成过程吗？从中你能简单分析生物进化的原因吗？

生物实验报告3

　　【探究内容】

　　探究种子萌发的环境条件

　　【探究目的】

　　１、了解种子萌发需要的环境条件。

　　２、学会进行探究实验的一般方法。

　　【探究器材】

　　种子100粒、5个能盖紧的罐头瓶、小勺一个、餐巾纸10张、标签纸5张

　　【探究过程】

　　提出问题：光的强弱会对种子萌发产生影响吗？水的多少会对种子的萌发产生影响吗？温度的.高低会对种子萌发产生影响吗？空气的流通会对种子萌发产生影响吗？

　　做出假设：光的强弱、水的多少、温度的高低都会对种子的萌发产生一定的影响。

　　制定计划：准备100颗绿豆种子，5个有盖的瓶子，10张纸巾，5张便利贴。1号瓶的水只能湿透纸巾，并不能淹没种子，放在空气流通，有阳光的地方；2号瓶的水不但能湿透纸巾，而且能把种子淹没，放在空气流通，有阳光的地方；3号瓶的水只能湿透纸巾，并不能淹没种子，用盖子把瓶子盖上，使瓶子空气不能流通；4号瓶的水只能湿透纸巾，并不能淹没种子，放在冰箱里，尽量使瓶子里的水不结冰；5号瓶不放水，放在空气流通，有阳光的地方。

　　实施计划：每天都进行实验并观察5个瓶子有什么变化，再把每天的变化都纪录下来。

　　分析结果：1号瓶大部分能发芽；2号瓶的种子皮破了，但不能发芽；3号瓶只有少许发了芽；4号瓶和5号瓶没有发芽

　　得出结论：想要种子发芽，一定要有适宜的光度；需要适量的水分，温度也要控制好，空气的流通也有一定的影响，但影响没有光度、水分和温度大，相对来说，空气流通的影响较小。

　　这个实验很简单，我们在做实验要分以上几步完成，就会很容易的完成实验。

　　【交流与评估】

　　1、根据你的问题和假设，应当将种子分成几组？XX每组应有多少粒种子？XX每组只有一粒种子可以吗？

　　2、对照组应提供的温度、水分、空气等条件应该如何？

　　3、每个实验组的处理，除了所研究的条件外，其他环境条件是否应与对照组相同？

生物实验报告4

　　实验生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定

　　一、实验目的

　　初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

　　二、实验原理

　　1．还原糖的鉴定原理生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。

　　斐林试剂由质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下：

　　CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O

　　用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的`颜色变化过程为：浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。

　　2．蛋白质的鉴定原理鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液(A)和质量浓度为0.01 g／mL(B)的硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。

　　3．脂肪的鉴定原理脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色，被苏丹Ⅳ 染成红色

　　三、实验过程（见书Ｐ18）

　　四、实验用品（见书Ｐ18）

　　五、注意

　　1.关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。

　　2.斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。

　　3．蛋白质的鉴定中先加双缩脲A，再加双缩脲B

　　六、讨论

　　鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的根据是什么？

生物实验报告5

　　前言：

　　生物化学实验在整个生物化学教学体系当中发挥着重要的作用，能够强化理论知识。并且在学生的动手能力和创新能力的培养方面有着非常大的优势。但是，在我国目前的许多高校当中，生化实验的课程仍然摆脱不了以教师为中心，重知识、重形式的倾向仍然非常的严重。并且在生化实验中存在着大量的限制性的问题及其操作，这在一定程度上对学生的创造能力的发挥造成了不利的影响。因此，在新的教育体制之下，必须对生化实验的教学进行改革，从而能够适应时展的潮流。

　　1、生物化学教学当中存在的一些问题

　　在我国目前的生化实验教学当中存在的问题主要包括以下四个方面的内容：

　　1.1教学手段的单一化：现行的生化实验教学模式仍然照搬传统的方式，即由实验人员在实验之前做好实验的准备，实验时老师对实验的原理、步骤及其相关的注意事项进行讲解和交代，之后学生再按着实验指导书上的内容进行实验。

　　1.2实验内容比较的陈旧：实验的内容主要是对上课所学的理论知识做一个巩固，并没有一些发散性思维的东西在里面，因而不利于学生实验思维的发展。另一方面，实验的内容大都受到了理论课得约束，实验内容显得比较的僵化，没有什么联系性，实验的仪器也比较的落后，实验方法简单。

　　1.3实验考试的模式不合理：学生的期末成绩构成还是以平时成绩为主，实验的成绩所占的分值比重比较的小，而且实验成绩主要是以实验报告为主。而实验报告中的实验原理、实验目的和实验数据之间的抄袭现象比较的严重，因此一份简单的实验报告并不能够真实的反应出学生的实验能力和实验数据的分析能力。

　　1.4大家对实验课的重视程度不够：在所有的课程当中，基本上都存在着重理论轻实践的教学方式，生物化学也是如此。有的学生在做实验的时候就是一种观望的态度。这种轻实践、重理论的教学培养方式抑制了学生的动手操作能力，也不利于学生创新能力的培养。

　　2生物化学实验的改革措施

　　2.1对实验内容进行改革：在生物化学实验中，应该善于总结过去生化实验的教学经验，并且在这基础之上对兄弟院校的优秀生物化学实验内容进行吸收整合，并且对这些成果在充分论证的基础之上结合自身的实际情况，重新制定实验教学的内容。比如说某学校的生物化学实验就是以分光光度技术、电泳技术、层析技术等生物化学实验技术为基础，在内容上包含了糖类、蛋白质、核酸等方面的内容，并且尽可能的选择有多种技术相结合的实验，这样每一个学生都有动手的机会。另一方面，实验的安排还应该考虑到学生基本技能的培训，并且在学生的动手能力方面能够发挥出一定的作用，其次还应该让学生掌握一些常规仪器的使用方法及其注意事项，在简单的基础之上适当的增加一些复杂的内容。

　　2.2 对教学手段进行优化：在新的教育体制之下，实验教学手段不能再以教师为中心，老师讲什么，学生就做什么，这种教学模式肯定会影响学生的自主动手的能力。应该为生化实验营造良好的氛围，让学生有着一定的发展空间，并且应该积极的鼓励学生对实验方案进行优化，在善于利用书本上的知识点的基础之上再次进行深度的挖掘。

　　实验案例：在影响酶促反应速度因素的实验当中，在实验指导书中用NaCl 和 CuS04作比较，这种比较方式只能够反映出钠离子或者氯离子为唾液淀粉酶的'促进剂，铜离子为唾液淀粉酶的抑制剂，但是却不能更进一步的加以区分。经过同学们的讨论研究，决定通过加入Na2S的方法进行对照。这样就能使结果显得更加的明确，即氯离子是促进剂，而铜离子是抑制剂。通过这种实验方案的简单修改，使得实验结构显得更加的合理，同时也使学生的思维能力和动手创新能力得到了显著的加强。

　　2.3对考试方式进行改革：首先，实验指导书上的实验原理、实验目的、实验步骤等内容应该改为由学生来讲解，这样不仅能够锻炼学生的口头表达能力，同时也能够显著的促进学生进行认真的实验复习。之后，老师可以通过提问的方式，对实验当中的注意事项及其有关的问题进行提问，通过这一步骤能够使学生在实验之前对实验的过程有一个比较清晰的认识，同时让学生能够积极的思考，激发求知的欲望。在实验的过程当中，老师应该仔细的观察，对学生在实验过程当中的一些错误操作进行及时的纠正，并且对错误进行分析。

　　最后，对生物化学实验的实验报告内容进行整合，摆脱以往的那种报告形式。实验报告的第一部分内容可以对实验进行综合的概述，主要是对实验原理、实验目的、实验步骤的叙述，这部分的内容不能够从实验指导书上进行照搬，而是应该用自己的语言进行叙述。第二部分的报告内容主要是包括实验现象及其相关实验数据的记录，这部分的实验数据要求科学严谨，而且不同组的学生的实验数据应该是不一样的。第三部分就是分析和讨论部分了，第三部分是整个报告的关键部分，主要包括实验当中出现的问题并且对问题的分析、实验的改进及其讨论等内容，这部分的内容还应该有着一些探索性的问题，引导学生进行实验的分析，从而培养学生分析问题、解决问题的能力和创新的意识。

　　3、小结

　　综上所述，本文简单的对生物化学实验教学当中存在的问题进行了分析，同时在如何通过生物化学实验培养学生的创新意识方面提出了一些建议措施。

　　总之，生物化学实验教学的改革是多方面的，老师应该根据学生及其学校条件的实际情况考虑，综合选择一条或者多条最佳的实验教学方式，从而提高学生的创新意识。

生物实验报告6

　　实验: 练习使用显微镜

　　目的要求:

　　1、练习使用显微镜，学会规范的操作方法。

　　2、能够独立操作显微镜。

　　3、能够将标本移动到视野中央，并看到清晰的图象。

　　材料用具：

　　显微镜、e字玻片、动植物永久玻片、擦镜纸、纱布

　　方法和步骤:

　　一、对照图示认识显微镜，识别显微镜的结构及各部分的作用。

　　二、练习使用显微镜

　　1、取镜和安放

　　右手握住镜臂，左手托住镜座。把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘7厘米左右处）。安装好目镜和物镜。

　　2、对光

　　转动转换器，使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘米的距离)。把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼睁开，便于画图)。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，可以看到白亮的视野。

　　3、放置玻片标本

　　4、观察 (先低后高)

　　把所要观察的玻片标本放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的`中心。转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

　　5、收放

　　注意事项

　　1、注意安全，不要损伤显微镜、目镜和物镜。

　　2、材料对准通光孔，用压片夹将玻片压好。

　　3、下降镜筒时，不要注视目镜，一定要注视物镜，以免损坏玻片标本和物镜头。

　　4、取下玻片标本时要小心;

　　5、实验完毕，把显微镜的外表擦拭干净。转动转换器，把两个物镜偏到两旁， 1

　　并将镜筒缓缓下降到最低处。最后把显微镜放进镜箱里，送回原处。思考回答：

　　1、在进行低倍镜观察时，使镜筒下降至接近玻片的过程中，眼睛应注视什么地方？为什么？

　　2、光线较暗时，应选用反光镜的平面还是凹面？

　　3、怎样计算出视眼中的图像的放大倍数？

　　4、若视眼中“e”位于左上方，怎样操作才能将其移到视眼中央？

生物实验报告7

　　实验名称：

　　用高倍显微镜观察叶绿体和细胞质流动

　　一、实验目的

　　1.初步掌握高倍显微镜的使用方法。

　　2.观察高等植物的叶绿体在细胞质基质中的形态和分布

　　二、实验原理

　　高等植物的叶绿体呈椭球状,在不同的光照条件下,叶绿体可以运动,改变椭球体的方向,这样既能接受较多的光照,又不至于被强光灼伤。在强光下,叶绿体以其椭球体的侧面朝向光源;在弱光下,叶绿体以其椭球体的正面朝向光源。因此,在不同光照条件下采集的'葫芦藓,其小叶内叶绿体椭球体的形状不完全一样。活细胞中的细胞质处于不断的流动状态，观察细胞质的流动，可以用细胞质基质中的叶绿体的运动做为标志。

　　三、材料用具

　　藓类的叶，新鲜的黑藻，显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，镊子，刀片，培养皿，铅笔

　　四、实验过程（见书Ｐ30）

　　1．制作藓类叶片的临时装片

　　2．用显微镜观察叶绿体

　　3．制作黑藻叶片临时装片

　　4．用显微镜观察细胞质流动

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　　五、讨论

　　1．细胞质基质中的叶绿体是否静止不动，为什么？

　　2．叶绿体的形态和分布与叶绿体的功能有什么关系？

　　3．植物细胞的细胞质处于不断的流动状态，这对于活细胞完成生命活动有什么意义？

　　4．用铅笔画一个叶片细胞，标出叶绿体的大致流动方向。

生物实验报告8

　　医学生物学是中医院校的基础课程，是一门实践性很强的学科。实验教学是医学生物学教学过程中重要的组成部分，实验教学效果的好坏直接影响课堂教学的效果和学生对医学生物学的兴趣。高年制的医学生是各医学院校重点培养的高层次医学人才，因此，对他们的要求远远高于五年制学生，除了要求他们掌握全面扎实的专业知识外，还要求他们具有较高的科研素质、创新能力和实践能力，进而全面提高高年制学生的综合素质，培养学生分析问题、解决问题的能力。基于此，实验教学改革成为我们教学的重点。笔者综合分析目前我室的生物学实验教学过程，除了基本的医学生物学实验外，还开设了现代生物学实验技术课，这门实验课主要包括细胞培养、细胞传代和染色体显带等实验；在进行观察体外培养细胞的.基本形态这个实验时，对该实验进行几个方面的改革，主要包括对实验教学方法、实验内容设计和实验具体操作进行改进，经调查，改革后实验教学效果较好。

　　一、实验教学方法改革

　　观察体外培养细胞的基本形态这个生物学实验的目的有两个：

　　一是掌握倒置显微镜的使用方法；

　　二是让学生了解细胞的基本形态结构和体外培养细胞的生长状况。

　　这样，有助于学生理解细胞是生命有机体的基本结构单位。针对这个实验目的，我们采用多媒体教学和国内外文献教学相结合，从体外培养细胞的形态特征类型开始讲解，结合不同细胞的图片，逐步讲解。同时，结合实物演示（培养瓶中装有不同时间的培养细胞）给学生讲解体外培养细胞的生长状况和细胞培养中的污染情况，使学生对这个实验先有感官认识，然后让学生自己设计实验。

　　二、实验内容设计

　　在实验内容设计过程中，我们首先对实验室的实验条件和经费进行考虑，然后结合高年制学生的实际条件进行实验设计。我校高年制的学生在进行现代生物学实验技术学习时，已经完成了基本的医学生物学实验，如显微镜的观察、蟾蜍的解剖等基本实验，所以，在进行现代生物学实验技术时已经具备了一定的知识水平。高年制的学生分两组进行这个实验，每组为21人，结合我室的实验条件，倒置显微镜只有一台，要完成这个实验而且效果要好必须进行以下的实验设计：

　　（1）细胞的准备：培养瓶细胞的准备和24孔板细胞的准备。

　　（2）盖玻片的无菌准备。

　　（3）细胞固定试剂的选择。

　　（4）显微互动实验室进行固定细胞的观察；倒置显微镜进行培养瓶细胞的观察。

　　（5）进行实验结果的分析、讨论。

　　三、具体操作步骤的改进

　　实验内容设计好以后，进行具体的操作步骤：

　　（1）将21个学生分为7组，每3人1组。

　　（2）以往实验是利用培养瓶培养细胞，但是只有一台倒置显微镜，所以改为24孔板内放置盖玻片培养细胞。

　　（3）每组进行培养细胞前准备。首先各组进行盖玻片的无菌处理，然后将无菌的盖玻片放入24孔板内。

　　（4）各组进行24孔板内细胞接种培养，即爬片。

　　（5）将有细胞的盖玻片取出，各组进行固定。

　　（6）第一组、第二组采用丙酮固定；第三组、第四组采用95%乙醇固定；第五组、第六组采用甲醛固定；第七组采用甲醇冰醋酸固定。

　　（7）在显微互动实验室进行细胞形态的观察。

　　（8）交叉进行倒置显微镜下观察培养瓶内的细胞。实验完成后进行实验报告的书写，内容包括实验原理、实验目的、实验设计及实验结果的讨论等。学生将固定的细胞和未固定细胞的形态观察进行讨论分析，讨论的过程较热烈，有的学生提出的问题特别有意义，这样既可以让每个学生参与实验，同时，又增强了同学提出问题、解决问题的能力。

　　针对观察体外培养细胞的基本形态这个实验，我们进行了以上这几个方面的改进，使学生在教学过程中的各个环节都主动参与并不断地提出新的问题。在这个过程中，学生得到锻炼的同时，教师也在教学中得到了学习，扩展了知识面。实验教学是树立学生实践观念，培养分析、解决实际问题能力，启迪学生创新思维，提高学生综合素质的重要环节。所以，在实验教学过程中，我们要不断地进行探索和改革，这样更有利于培养学生的新能力和科研素质。

生物实验报告9

　　实验教学是高等教育教学活动的重要环节。通过实验课不仅可以加深学生对课堂内容的理解，巩固已学到的理论知识，而且能够培养学生理论联系实际的能力、分析问题和解决问题的能力，对于活跃思维、提高创新能力起着积极的作用。

　　食品微生物学是食品专业学生必修的专业课，是普通微生物学的延伸。食品微生物学是一门实践性和应用性较强的学科，它要求学生在系统学习基础理论知识的基础上，掌握食品微生物学检测技术、分离纯化技术、鉴定技术、发酵食品的制备技术、食品加工与保鲜技术以及现代分子微生物学实验方法等。通过食品微生物实验教学培养出不仅具有丰富理论知识，而且能掌握现代生物技术并熟练操作的高技能人才。

　　如何加强食品微生物实践教学的组织指导，如何调动学生的积极性，提高实验教学效果一直是我们关注和探索的问题。下面简单谈一下我们在食品微生物实验教学中遇到的问题，解决的方法和对一些问题的思考。

　　1、精心选择实验内容，调动学习积极性

　　随着食品工业和微生物检测技术的迅速发展，食品微生物学及其实验课的内容也不断扩展，而实验课既受理论课内容进度的限制，又受课时及实验室等客观条件的限制。要在有限的课时内，系统、科学地完成食品微生物所有的实验项目是绝对不可能的，这就要求我们实验教师在掌握微生物学教学大纲的前提下，结合现代科技的发展和食品微生物的研究动态，精心设计实验课教学体系，合理选择实验项目。

　　选择实验内容，我们由浅入深，由感性到理性。首先要求学生对食品中常见细菌、酵母菌、霉菌、乳酸菌进行观察，掌握其性状特征和培养生长条件。学会识别哪些是有益菌，哪些是有害菌，利用有益菌的代谢活动制造更多的发酵产品，提高食品的质量，同时防止有害菌引起食品腐败变质以及食物中毒。其次选择有代表性的发酵食品作为实验内容，使学生了解利用微生物生产发酵食品的整个过程，通过这些实验使同学们对食品发酵有一个总体印象，并能举一反三。最后对不同的食品和发酵食品设计实验，让学生掌握食品微生物学检测技术、分离纯化技术、鉴定技术。并在课堂上结合自己的科研成果和食品研究热点介绍食品工业发展的前沿动态。

　　实验设计过程中，不仅有验证性实验，更多地引进了综合性和设计性实验，学生分成几人一组，让学生从实验设计，自己选择原材料，准备实验材料，试剂的配置，培养基的制备和灭菌等都由学生自己完成，最后写成规范的实验报告。学生对此积极性很高，甜酒酿、酸奶、腐乳等都是同学们喜欢并制作的发酵食品。在这个过程中学生将所学内容贯通，并熟悉掌握各个环节的操作步骤，这对学生将来步入社会，在工作岗位上独立开展工作都会有很大的帮助。

　　2、强化基础技能的训练，有效组织管理实验教学

　　食品微生物学是在掌握微生物的基本实验技能的基础上开展的，学生无菌操作观念的培养、正确使用、掌握微生物的实验仪器，如光学显微镜、灭菌消毒器械等都非常重要。但基于很多原因，学生的这些基础技能还是很薄弱，所以我们在进行食品微生物的每一个实验的每一个步骤中只要涉及这些基础性的'知识，都会给予强调，亲自演示。

　　学生微生物基础技能培养和形成，不是一两堂课能完成，也不是单单有老师演示后学生就可以掌握，必须让学生每人亲自动手。但在实际教学过程中，由于学生人数的增加，硬件等条件限制，人手一套实验器材不现实，那么在有限人力、有限资源情况下，使每一位同学都能动手操作并熟悉实验过程，有效组织和管理实验教学过程就尤为重要。

　　(1)首先任课教师和实验技术人员充分做好预实验，对实验的关键步骤和关键操作点都做到心中有数，在授课过程中有重点地强调，并分析某步骤出现问题可能会出现的结果。

　　(2)每次实验之前任课教师和实验技术人员就实验进行积极的沟通，不仅对实验准备的物品和材料沟通，更要对实验的组织过程协商。

　　(3)在实验过程中则需要任课教师和实验技术人员相互协作，并充分发挥学生班干部和小组长的作用。课堂理论教学课和实验课最大的区别在于，实验课更注重学生的动手参与，以及实验过程出现问题发现问题的及时解决。

　　(4)教师要严于律已，教师要严格要求自己，实验过程中耐心指导，热情帮助，回答好学生提出的每个问题，并随时纠正不正确或不规范操作。

　　3、加强实验课考核，引进综合实验考评

　　实验课的成绩给定，往往包括实验课出勤率和实验报告成绩两方面综合。所以首先就要求教师认真考勤，只有学生的出勤率有保证才能有效地组织教学活动。其次，要求实验报告书写规范，详细完成实验报告，对实验结果进行讨论，实验失败要分析原因。同时教师也对实验报告认真批改，实验报告是对实验的总结，也是对实验课质量高低的检验。通过对实验报告的批改，可以发现学生的实验操作能力和观察分析问题的能力。

　　实际教学中，实验报告雷同和抄袭的现象比较多见，为综合考评学生实际动手能力和对实验技能的掌握，建议今后引进期末的综合实验考评:即将各个试验项目设计成不同的实验题目，让每个学生随机抽取并在有限的时间内独立完成操作，视完成的情况给予评分。比如:“食品中常见菌类的平板培养”考察了无菌操作、培养基的制备，对食品中常见菌类平板接菌技术;“食品中常见菌类的形态观察”考察了革兰氏染色，各真菌形态辨别等。在进行具体考核过程中，可把每个考核的内容进行量化定出详细的评分标准，根据学生的每一个操作环节现场打分，并对同学进行现场提问，让学生进行答辩。

　　4、有计划推进实验室的开放加强实验室开放管理

　　微生物实验室的开放是对食品微生物实验课的有益补充，能强化、巩固、提升对食品微生物课程内容的理解，我们鼓励学生设计和开发自己的科研项目，而且学校有很优厚的资金加以支持。但是开放实验室不是无条件的，有时因实验操作不当引起的安全隐患是很严重和难以预料。因此实验室开放时管理须给予加强。

　　建立科学的管理机制，利用校园网建设实验网站，公布开放实验项目的题目、时间和地点，供学生选择和预约。

　　专人负责学生的科研队伍，对菌种、标准品、和学生用到的有毒有害物质要有专人负责，注意保管，不随意丢弃，做好无害化处理。对使用仪器学生做好使用登记，实验物品注意清洗、归还、交接。

　　总之，食品微生物实验课，只有提高对实验教学活动的认识，精心选择实验内容，合理有效组织和管理实验过程，并加强实验课的考核，在此基础上，推进实验室对学生的开放，加强开放实验室的管理，就能确保实验课安全、有序、成功的完成，达到教学目的，也使学生真正有所收获。

生物实验报告10

　　实验教师：xxx

　　所在学校：xxx中学

　　目的要求：

　　1练习徒手切片

　　2认识叶片的结构

　　3画叶片的表皮细胞和保卫细胞

　　材料用具：

　　新鲜叶片（如菠菜、槐树、蚕豆的叶片），显微镜，双面刀片（两片、并在一起、一侧用胶布粘牢）、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、盛有清水的培养皿、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。

　　方法步骤

　　方法与步骤要点

　　注意事项

　　（一）练习徒手切片，制作叶片横切片的临时切片

　　1将新鲜的'叶片平放在小木板上。

　　2右手捏紧并排的两片刀片，沿着图中虚线的方向，迅速切割。

　　3把刀片夹缝中存在的切下的薄片放入盛有清水培养皿中。要多切几次（每切一次，刀片要蘸一下水）。

　　4用毛笔蘸出最薄的一片，制成临时切片。叶片下面要垫上小块木板，以防损坏桌面。刀片要捏紧，切割速度要快，注意安全。

　　为了便于观察，载玻片的水滴中可以同时放几片叶的横切片，选择切得最薄的一片用来观察。

　　（二）观察叶片的结构

　　1．用显微镜先观察叶片横切面的临时切片，再观察叶片的永久横切片。

　　2．观察时注意分清时的表皮、叶肉和叶脉。

　　仔细观察上、下表皮细胞的区别

　　（三）观察叶片的下表皮

　　1．用镊子撕下一小块叶片的下表皮，制成临时装片。

　　2．用显微镜进行观察，下表皮细胞的形态是什么样子的，下表皮上有没有气孔？

　　撕取下表皮时，一定要薄，否则影响观察效果。

　　注意观察气孔的结构。

　　（四）画图

　　在下面空白处画出下表皮上一对保卫细胞及周围的几个表皮细胞，这一对保卫细胞要详细画，周围的细胞只需勾出轮廓。

　　画图时，要真实、实事求是。

　　讨论与交流

　　1．保卫细胞的结构特点对植物的蒸腾作用有什么意义？

　　2．从结构上看，叶片有哪些方面是适于接受阳光的？

生物实验报告11

　　一、学生基本情况分析：

　　生物学对于七年级学生是新接触的一门自然科学，多数学生的兴趣较浓，学习劲头较足，涉及到学习方法和学习习惯的逐渐养成，就这次期中考试成绩来看，学生基本上考出了自己的真实水平，也有少数学生发挥欠佳。下面就本次期中考试试题作以下分析。

　　二、整体分析：

　　这次期中考试，生物试卷共30分，考试时间18分钟。试卷由两大题组成，分选择题和填空题。突出考察学生基础知识的掌握情况和实验的能力。就试卷内容来看，题量比较适宜，难易程度体现了教材的.重点、难点，没有偏题、怪题，覆盖面比较广，知识点多且灵活，更能与生活实际中的问题密切结合。对发展学生智力，提高学生能力有所帮助。本次考试平均分为16.8分。

　　三、卷面分析：

　　1.选择题共10个，共占20分，实得分为12.4分，得分率为62%。错误较多的有：2小题、5小题、6小题、8小题、10小题，主要是动植物结构层次部分的内容，理解性较强，学生掌握情况不好。而生物特征本章的内容学生掌握良好，得分率达78%。

　　2．填空题共10分，实得分4.4分，得分率为44%。本大题分为5个小题，主要为实验探究题，要求学生对实验的过程，现象要清楚，能根据实验现象得出结论。学生失分较多，主要是学生对实验题还有一定的陌生，对实验步骤上不够严谨，是十分的一个主要原因。

　　四、总述。

　　本次考试认识到了在对七年级的生物教学中存在了一些不足和问题，在以后的辅导中要着重进行基础知识的复习。所以在下半学期中将采取措施：

　　1、抓基础，重应用。

　　要重视基础知识的教学，对重要的生物知识加强理解。对需要识记的知识，要求学生掌握。加大对学生思维能力的训练。

　　2、加强知识与实际的联系与探究。

　　教学中要密切联系学生的生活，注重培养学生运用知识解决问题的能力。要把知识放到实际问题情境中来学习，让学生在问题情景中结合自身体验来思考问题，讨论交流，寻求解答途径。

　　3、重视实验教学力争做好每一次演示实验和分组实验，引导学生自主探究，提高学生的动手能力和分析，观察与归纳能力。

　　4、加强专题训练和针对性训练。

　　总之，通过这次考试，认真进行总结，反思教学效果。根据学情制定合理的教学计划，理清工作思路，狠抓课堂教学，注重实效，提高教学质量。

生物实验报告12

　　一、实验目的

　　初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

　　二、实验原理

　　1、还原糖的鉴定原理

　　生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。

　　斐林试剂由质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05 g/mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下：

　　CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O

　　用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的`颜色变化过程为：浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。

　　2、蛋白质的鉴定原理

　　鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液(A)和质量浓度为0.01 g/mL(B)的硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。

　　3、脂肪的鉴定原理

　　脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色，被苏丹Ⅳ染成红色

　　三、实验过程（见书P18）

　　四、实验用品（见书P18）

　　五、注意

　　1、关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。

　　2、斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。

　　3、蛋白质的鉴定中先加双缩脲A，再加双缩脲B

　　六、讨论

　　鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的根据是什么？

生物实验报告13

　　《普通生物学》是高等院校生物工程、生物技术专业的一门必修专业基础课程，也是一门实验性很强的课程。近年来，许多高校均已开设这门综合课程。该课程以培养学生的生物学能力，提高学生的生物学素养为总目标。如何能更好地实现这一课程目标？如何提高实验教学质量？围绕这些问题，我在普通生物学实验教学体系、教学内容、教学方法及实验考核办法等方面作了一些改革，取得了一些成果。

　　一、精选内容，构建合理的《普通生物学》实验项目体系

　　精选实验内容，并在实践过程中进行完善修改，构建合理的《普通生物学实验》项目体系。精选内容时要注意以下几个方面。

　　（一）注重内容的经典性和基础性。

　　在精选实验内容过程中，进行必要的实验项目取舍。有些经典的实验内容经过长期教学实践的锤炼，对学生加深基础知识的理解、增加基本技能的锻炼有很好的帮助，像这样的经典实验内容一定要保留。在保留的基础上，还要特别注意实验内容的创新。例如：“显微镜的使用”是一个很基础、很经典的实验，并为后续课程的实验提供一定的基本技能，在这个实验中可结合细胞形态观察，动物和植物细胞结构比较、组织器官的制片和观察等内容。

　　（二）注重内容的连续性和层次性。

　　为了改变目前实验项目验证性实验过多，综合性、设计性实验过少的情况，在内容层次化结构中，要注意根据各自的教学目标，反映从认知层面到应用层面再到创新层面的逐步提高的过程，这样符合学知识、用知识，发展创造能力的循序渐进的发展规律。

　　在认知层面上的实验如“常见动植物基本组织结构的制片观察”、“生物绘图”等的基础上进行综合层次实验，如“鱼的`系列实验”、“植物群落特征调查”等。在基础和综合实验基础上进行设计创新实验。在完成必做实验以后，布置学生进行设计实验，可学生自选题目，也可老师提出问题让学生自行探究，锻炼学生思维，培养自主学习能力。

　　（三）注意内容的可行性和实际性。

　　在确定实验内容时，不仅要根据课程的需要，而且要根据实际情况，包括要考虑学生的认识水平、实验室的仪器设备情况，以及结合当地实验材料采集、培养的难易程度等方面的因素选择可操作性强的实验内容。如“水螅、涡虫、蛔虫”等实验材料，如今越来越难找到，但又有其典型性，于是，将其列为选做实验，或者换作其他易于获得的实验材料进行相关实验。

　　二、修订大纲，构建合理的《普通生物学》实验教学体系

　　修订实验教学大纲是实验教学工作的重要组成部分，提高教学质量的主要教学环节之一，对提高学生实际操作水平，加强学生创新能力和实践能力的培养起着重要作用。依据我院生物工程和生物技术专业教学计划和《普通生物学》课程的要求，本实验课程共有20个课时，在编制本课程实验教学大纲的过程中，应明确实验类型（必修、选修）、实验属性（演示性、验证性、综合性、设计性），培养学生进行科学实验的基本方法与技能，激发学生的创新思想能力，提高创新能力。

　　生物工程专业在课程设置上侧重于细胞、生化、微生物、遗传等工厂化操作领域。生物技术专业则侧重于在动植物个体生物学方面内容，因此，在编写实验教学大纲时，针对不同专业，进行内容取舍。生物工程专业着重于培养学生在动物学、植物学结构和功能方面的实验基本技能，生物技术专业着重于培养学生在动物学、植物学发展和应用方面的实验基本技能。

　　三、规范教学，构建多元化的《普通生物学》实验教学指导体系

　　为了规范实验教学，提高实验教学质量，编写实验教学指导书。并从操作、实验报告的撰写等各个方面，给学生以指导，努力构建多元化的实验教学指导体系。

　　（一）完善课程体系，编写适用的实验指导书。

　　随着普通生物学实验教学改革的不断深入，实验教材的编写也在发展中。目前，仍然很难找到一本适合我院实际的普通生物学实验指导书，这给教学带来了一定的难度和不便。因此，根据本课程改革的需要和我国高校生物科学实验的教学改革思路，在近几年教学实践的基础上，努力编写普通生物学实验指导书，希望能力求做到完整、系统、实用、可操作，满足普通生物学实验的教学需要。目前只有部分手稿，在学生实验过程中起到了较好的指导作用。

　　（二）加强实验报告撰写的指导。

　　撰写实验报告是实验教学的一个重要环节，是衡量学生分析问题、解决问题能力的一个重要依据，因此，要重视学生实验报告的撰写质量，在认真批改实验报告后，对学生进行集体指导和个别指导，对不符合要求及不认真撰写的实验报告，坚决要求返工改正。通过实验报告的撰写让学生展开多维度的思考。

　　四、注重以人为本，改革《普通生物学》实验教学方法

　　在该课程教学过程中，应该牢固树立以学生为主体的以人为本意识，改革教学方法，不断提高实验教学质量。

　　（一）培养学生严谨的科学态度和作风。

　　从实验的准备到完成，指导学生直接参与实验的准备和整理工作，在学生预习实验的基础上，鼓励学生参与实验所用物品的准备工作。这样可以促使学生对实验全部过程有系统的认识，独立地完成实验，培养创新意识，提高实践技能、使学生在严格、系统的训练中，提高动手能力，为将来就业或继续深造创造条件。

　　（二）改进教学方法，调动学生主观能动性。

　　实验课常规由教师演示，实验目的、实验原理、材料用具、操作步骤及结论等按要求进行，在教学实践中，我发现有的学生只重视最后的实验数据和实验结果，而忽视实验过程中仪器的正确使用。针对这种情况，实验指导教师每次上课，都要自始至终认真指导学生的操作技能训练，加强在课堂中的现场指导，保证学生实验操作的规范性。对于综合性实验，除了课内知识外，还要积极鼓励学生自己设计一些感兴趣的课外实验来培养学生观察、分析、动手解决问题的能力；通过植物园、动物园、生态学野外实习所获得的实践知识，会对学生将来从事科学研究产生积极的作用，因此，在实习中融入实训的内容是提高实验教学质量的一个重要途径。

　　五、规范实验考核模式，建立完善的《普通生物学》实验评价体系

　　在以往的教学中，学生的实验成绩主要以实验报告成绩来评定，这样做不能全面考核学生的实验能力和水平。在《普通生物学》实验教学改革中，采取考勤、实验态度、实验预习、实验操作、实验报告等多项考核定成绩的方法，并坚持实验操作考核。具体考核内容包括三个部分：平时的实验态度与实验操作占30%；实验报告的书写与实验结果的分析讨论占30%；随机抽取题目并独立完成的实验考试占40%。三种方式综合评定实验成绩，避免了教师只看平时表现打分的过分主观性，以及不同教师不同的评定标准；更正了学生只注重操作，忽视对实验结果分析和总结的错误观念；真正有利于学生实际操作能力的培养。

　　总之，普通生物学实验课教学改革涉及面广，环节多，比较复杂。我们只是在这方面做了一些有益的尝试，并取得了一定的成功经验。通过实验教学改革，学生的实验能力得到了充分的训练和提高，主观能动性和创造性得到了培养，真正实现了在实验教学中培养学生分析问题与解决问题的能力、独立自主的工作能力、合作与交流的能力、改革与创新的能力。

生物实验报告14

　　质粒DNA的提取、纯化及检测

　　姓名：XXX学号：2011001400XX年级：20xx级生物基地班实验日期：20xx年9月16日—30日组别：6组同组者：XX

　　一、【实验目的】

　　1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒DNA的原理和方法。

　　2、学习并掌握凝胶电泳进行DNA的分离纯化的实验原理。

　　3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

　　4、学习并掌握凝胶中DNA的分离纯化方法。

　　二、【实验原理】

　　1、质粒DNA的制备方法

　　质粒（Plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链DNA分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200Kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的DNA。

　　质粒DNA的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒DNA大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒DNA。主要方法包括：碱裂解法：0。2molNaOH+1%SDS；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；SDS裂解法：10%SDS，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒DNA。

　　2、质粒DNA的提取——碱变性提取法

　　在细菌细胞中，染色体DNA和质粒DNA均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶pH值不同。在pH值高达12。0的碱性溶液中，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒DNA的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用pH值4。6的KAc（NaAc）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒DNA可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体DNA不能复性，而是与不稳定的大分子RNA、蛋白质—SDS复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒DNA分离。溶于上清液的质粒DNA，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性质类似，乙醇沉淀

　　DNA的同时，也伴随着RNA沉淀，可利用RNaseA将RNA降解。质粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒DNA。

　　3、凝胶电泳进行DNA分离纯化

　　电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定pH条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化DNA的片段，是分子生物学的核心技术之一。

　　凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中DNA的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，EB）或SYBR Gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链DNA在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的DNA条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

　　分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的DNA都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行DNA序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的DNA上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—D—吡喃半乳糖与3，6—脱水—L—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段DNA（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定DNA的相对分子质量，分离经限制酶水解的DNA的片段，进一步纯化DNA等。

　　琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。DNA在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品DNA分子的大小、DNA分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

　　三、【实验材料】

　　1、实验仪器

　　培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（Eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

　　2、实验试剂

　　LB培养基，抗生素Ap（氨苄青霉素），溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ，RNaseA母液，TE缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（PCI）混合液，预冷无水乙醇，TAE电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（EB），DNA相对分子质量标准物DNA Marker λ/Hind Ⅲ，5mol/L pH 5。2的醋酸钠。

　　四、【实验步骤】

　　1、准备实验

　　配制LB液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配LB固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

　　2、菌体培养

　　在含有Ap的LB平板上挑取一环携带有质粒pUC19的.E。coli DH5单菌落，接种于20mlLB液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加Ap100ul

　　（100ug/ml），质粒pUC19具有Ap抗性基因，使得带有pUC19的质粒得以生长。过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mlLB液体培养基中，培养基中加入Ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

　　3、质粒提取

　　（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

　　（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液Ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

　　（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液Ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液Ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使

　　溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制DNase的活性，抑制微生物的生长。Tris—Cl溶液提供适当的pH。

　　（4）按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml（与溶液Ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液Ⅱ中的NaOH使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体DNA、质粒DNA和蛋白质变性；SDS为下一步沉淀做铺垫。

　　（5）按比例加入冰预冷的溶液Ⅲ1。5ml（与溶液Ⅰ、Ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质SDS复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH，因为长时间的碱性条件会打断基因组DNA，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被PDS共沉淀。同时变性的质粒DNA复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

　　（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3MNaAc混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀。

　　（7）以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

　　（8）以12000rpm离心5min，离心管底部DNA沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

　　（9）将DNA沉淀溶于1mlTE缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个Eppendorf管中。TE是pH缓冲液，为DNA提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有EDTA是二价阳离子的螯合剂，抑制DNA酶作用。

　　4、质粒纯化

　　（1）Eppendorf管中加入RNase A（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

　　（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）Tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的Eppendorf管中。苯酚是经Tris饱和后的，显黄色。苯

　　酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

　　（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的Eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响DNA的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

　　（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的Eppendorf管中，得上清液400ul。

　　（5）向上清液中加入1/10体积的NaAc混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

　　（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到DNA沉淀，为白色。

　　（7）向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部DNA沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

　　（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulTE溶解于1管中。

　　5、质粒检测

　　（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×TAE电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

　　（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×TAE 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

　　（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

　　（4）把胶槽取出，小心滑出胶块，放进EB溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

　　（5）凝胶成像仪观察。

　　五、【注意事项】